Plásmido CRISPR de Activación (h) NG2: sc-400699-ACT

CSPG4 codifica el proteoglicano transmembrana de sulfato de condroitina NG2 (también conocido como HMW-MAA), un receptor asociado a la matriz pericelular que regula la adhesión, la migración y la proliferación celulares. NG2 participa en redes de señalización vinculadas a integrina/FAK, PDGFR y la remodelación del citoesqueleto, influyendo en las interacciones con la matriz extracelular y en la plasticidad celular. En el sistema nervioso es un marcador definitorio de las células precursoras de oligodendrocitos y modula procesos relacionados con la mielinización, mientras que en otros tejidos sostiene comportamientos de células perivasculares y estromales. La expresión desregulada de CSPG4/NG2 se ha asociado con cambios en la capacidad invasiva y en las interacciones con el microambiente en múltiples contextos tumorales, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del estado de linaje y de la señalización célula–matriz.

NG2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSPG4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NG2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSPG4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSPG4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSPG4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NG2 en células tumorales con expresión de CSPG4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.