NFATc1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400164

Übersicht

NFATC1 codiert NFATc1, einen durch Calcium/Calcineurin regulierten Transkriptionsfaktor, der nach Signalen über den T‑Zell‑Rezeptor in den Zellkern transloziert, um Programme der Immunaktivierung zu koordinieren. NFATc1 verknüpft Ca2+-abhängige Signalübertragung mit MAPK- und AP‑1‑Signalen und steuert so in Lymphozyten die Transkription von Zytokinen, kostimulatorischen Molekülen und differenzierungsassoziierten Genen. Über das Immunsystem hinaus trägt NFATc1 über Crosstalk mit RANKL, NF‑κB und anderen transkriptionellen Netzwerken zur Osteoklastogenese und zu Zellschicksalsentscheidungen bei. Eine fehlregulierte NFATc1‑Aktivität wurde mit entzündlicher Pathobiologie und aberranten Transkriptionszuständen in mehreren krebsbezogenen Kontexten in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur Kopplung von Signaltransduktion und Transkription unterstützt.

Das NFATc1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NFATC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NFATC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NFATC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NFATc1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NFATC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NFATc1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NFATC1-Exone abzielen, die für die NFATc1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NFATC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NFATc1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NFATc1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NFATC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NFATc1 HDR-Plasmid (h) und NFATc1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NFATC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NFATC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.