NFκB p50 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400087-ACT

NFKB1 kodiert die NFκB‑p50‑Untereinheit, eine zentrale DNA‑bindende Komponente der NF‑κB‑Transkriptionsfaktorfamilie, die induzierbare Genexpressionsprogramme in Immunität und Stressantworten reguliert. p50 bildet häufig Heterodimere mit RELA (p65) oder Homodimere, die Transkriptionsausgänge steuern, welche Zytokine, Chemokine, Adhäsionsmoleküle und antiapoptotische Faktoren kontrollieren. Die NFκB‑p50‑Aktivität wird nachgeschaltet von TNF‑Rezeptor‑, IL‑1/TLR‑, Antigenrezeptor‑ und DNA‑Schadens‑Signalwegen integriert, und zwar über eine IKK‑abhängige Prozessierung von p105 zu p50 sowie die Translokation in den Zellkern. Eine fehlregulierte NFκB1‑Signalgebung wird mit chronischer Entzündung, Immundysregulation, onkogenen Transkriptionsprogrammen und veränderten Antworten auf Infektionen und zellulären Stress in Verbindung gebracht, weshalb sie in Signalweg‑ und Gen‑Netzwerkstudien häufig untersucht wird.

NFκB p50 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NFKB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NFκB p50 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NFKB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NFKB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NFκB p50-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NFKB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NFκB p50-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NFκB p50-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NFKB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.