neuropilin-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400428-ACT

NRP1 kodiert Neuropilin-1, einen multifunktionalen transmembranen Co-Rezeptor, der die Signalübertragung von Semaphorinen der Klasse 3 und vaskulären endothelialen Wachstumsfaktoren moduliert und so Leitsignale, angiogenes Sprossen sowie die Gewebemorphogenese mitprägt. Neuropilin-1 koordiniert die Bildung von Rezeptorkomplexen mit VEGFRs und Plexinen, um Zytoskelettdynamik, Migration, Adhäsion und Endozytose zu beeinflussen, mit nachgeschalteten Effekten auf die PI3K–AKT-, MAPK/ERK- und Rho-GTPase-Signalwege. In der menschlichen Biologie ist eine veränderte NRP1-Expression mit einer fehlregulierten Gefäßremodellierung, dem Trafficking von Immunzellen und Signalprozessen im Tumormikromilieu assoziiert, wodurch es ein breit untersuchter Knotenpunkt in Netzwerken der Zell‑Zell‑Kommunikation ist. Diese Funktionen stützen Forschungsarbeiten zur Endothelbiologie, zur neuroentwicklungsbezogenen Musterbildung und zu Mechanismen invasiven Wachstums und der Metastasierung.

neuropilin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NRP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

neuropilin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NRP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NRP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen neuropilin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NRP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von neuropilin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des neuropilin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NRP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.