Neurogenin 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401250-ACT

NEUROG2 kodiert Neurogenin 2, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der während der menschlichen Neuroentwicklung als proneuraler Determinant wirkt. Es steuert die Festlegung auf eine neuronale Linie und die Differenzierung, indem es Genexpressionsprogramme koordiniert, die mit Neurogenese, Zellzyklus-Austritt und der Reifung exzitatorischer neuronaler Phänotypen verknüpft sind. Neurogenin 2 integriert übergeordnete entwicklungsbiologische Signalinputs und fördert transkriptionelle Netzwerke, die die Spezifizierung kortikaler und spinaler Neurone sowie das Neuritenwachstum prägen. Eine veränderte Regulation NEUROG2-assoziierter Programme ist relevant für Studien zu neuroentwicklungsbedingten Funktionsstörungen, neuronaler Reprogrammierung und Linienplastizität in neurologischen Krankheitsmodellen.

Neurogenin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NEUROG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neurogenin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NEUROG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NEUROG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neurogenin 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NEUROG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neurogenin 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neurogenin 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NEUROG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.