Neurofibromin Plasmide Double Nickase (h): sc-400625-NIC

NF1 codifica la neurofibromina, un ampio oncosoppressore citoplasmatico che funziona principalmente come proteina attivatrice della GTPasi di Ras (Ras-GAP), convertendo Ras-GTP attivo in Ras-GDP per limitare la segnalazione a valle delle vie MAPK/ERK e PI3K-AKT. Attraverso questa regolazione negativa, la neurofibromina influenza la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la sopravvivenza, e contribuisce al controllo omeostatico della segnalazione dei fattori di crescita. Alterazioni con perdita di funzione di NF1 compromettono la regolazione della via di Ras e sono fortemente associate alla neurofibromatosi di tipo 1 e a processi oncogenici guidati da Ras in molteplici contesti tissutali. La perturbazione di NF1 è quindi ampiamente utilizzata per studiare la trasduzione del segnale, la plasticità cellulare e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli rilevanti per la malattia.

Neurofibromin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.