Neurofibromin 2/NF2/Merlin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400504-ACT

NF2 kodiert Merlin (Neurofibromin 2), einen membranassoziierten Tumorsuppressor, der das kortikale Aktinzytoskelett mit transmembranen Rezeptoren und Zellkontakt-/Junktionskomplexen verbindet, um Kontaktinhibition und Zellmechanik zu regulieren. Merlin moduliert die Signalübertragung des Hippo-Signalwegs, indem es die YAP/TAZ-Aktivität begrenzt, und greift in Netzwerke von Rezeptor-Tyrosinkinasen, PI3K–AKT und MAPK ein, um Proliferation, Migration und Polarität zu koordinieren. Zudem trägt es zur Stabilität von Adhärenz- und Tight Junctions bei, beeinflusst damit die Gewebearchitektur und mechanotransduktive Antworten. Eine Störung der NF2-Funktion wird mit Neurofibromatose Typ 2 und einem Spektrum von Merlin-defizienten Tumoren in Verbindung gebracht, wodurch NF2 ein zentraler Knotenpunkt für die Untersuchung von Wachstumskontrolle und zytoskelettaler Signalgebung ist.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neurofibromin 2/NF2/Merlin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neurofibromin 2/NF2/Merlin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neurofibromin 2/NF2/Merlin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.