NEDL2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410607

Descripción general

HECW2 codifica NEDL2, una ligasa E3 de ubiquitina de tipo HECT que regula el recambio proteico y la señalización mediante la modificación dependiente de ubiquitina de sustratos celulares clave. La actividad de NEDL2 contribuye a la proteostasis e influye en vías relacionadas con el desarrollo neuronal, la función sináptica y programas transcripcionales sensibles al estrés, al modular la estabilidad y la disponibilidad de proteínas reguladoras. La disrupción o regulación alterada de HECW2 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y se estudia en el contexto de una señalización de ubiquitina aberrante que puede afectar el control del ciclo celular, la diferenciación y la integridad del genoma. Como componente de la vía de la ubiquitina, NEDL2 es relevante para estudios mecanísticos sobre el reconocimiento de sustratos, la especificidad de la red E2/E3 y los efectos aguas abajo en nodos de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NEDL2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HECW2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HECW2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HECW2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NEDL2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HECW2 para la investigación de la señalización de NEDL2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HECW2 críticos para la función de NEDL2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HECW2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NEDL2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NEDL2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HECW2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NEDL2 (h) y el plásmido HDR NEDL2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HECW2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HECW2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.