NEDD4-L Lentiviral Activation Particles (h): sc-403647-LAC

NEDD4L kodiert NEDD4‑L, eine E3‑Ubiquitinligase vom HECT‑Typ, die den Proteinumsatz reguliert, indem sie die Ubiquitinierung von membranständigen und zytosolischen Substraten katalysiert. Über die Kontrolle von Kanälen und Transportern wie ENaC moduliert sie den Ionentransport und die epitheliale Homöostase und trägt zur Dynamik der Signalübertragung bei, indem sie Rezeptoren und Komponenten von Signalwegen über ubiquitinabhängigen Transport (Trafficking) und Abbau feinjustiert. Die Aktivität von NEDD4‑L greift in Signalwege wie TGF‑β/SMAD, Wnt/β‑Catenin und PI3K–AKT ein und beeinflusst dadurch Zellpolarität, Differenzierung und Stressantworten. Eine Fehlregulation der Expression oder Funktion von NEDD4L wurde mit einem veränderten Natriumhaushalt und kardiovaskulären Phänotypen in Verbindung gebracht und in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten, darunter Krebs und fibrotisches Remodeling, beschrieben – was NEDD4L zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Ubiquitin‑Signalgebung macht.

NEDD4-L Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NEDD4L-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NEDD4-L Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NEDD4L-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NEDD4-L-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NEDD4L-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.