Nectin 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401328-ACT

NECTIN1 kodiert für Nectin-1, ein immunglobulinähnliches Zelladhäsionsmolekül, das in Adhärenzverbindungen (adherens junctions) angereichert ist und Ca2+-unabhängige homophile und heterophile Interaktionen vermittelt, um Zell-Zell-Kontakte zu stabilisieren. Nectin-1 bindet an Afadin (AF6) und wirkt mit Cadherin–Catenin-Komplexen zusammen, um den Aufbau von Zellkontakten, die epitheliale Polarität sowie den Umbau des Aktin-Zytoskeletts zu regulieren und dadurch Gewebemorphogenese und Barriereintegrität zu beeinflussen. Über die reine Adhäsion hinaus trägt Nectin-1 zu kontaktvermittelter Signalübertragung bei, die Programme der Zellmigration und Differenzierung beeinflusst. Veränderte Funktion oder Expression von NECTIN1 wurde mit Entwicklungsanomalien in Verbindung gebracht, die kraniofaziale und ektodermale Gewebe betreffen, was seine Bedeutung für Studien zur epithelialen Organisation und zu krankheitsassoziierten Adhäsionsdefekten unterstreicht.

Nectin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NECTIN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nectin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NECTIN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NECTIN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nectin 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NECTIN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nectin 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nectin 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NECTIN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.