Plásmido CRISPR de Activación (h) NCX2: sc-403352-ACT

SLC8A2 codifica el intercambiador humano Na⁺/Ca²⁺ NCX2, un antiportador de la membrana plasmática que acopla el gradiente de Na⁺ a la extrusión de Ca²⁺ o, bajo condiciones electroquímicas específicas, a la entrada de Ca²⁺. Al modular la dinámica del Ca²⁺ citosólico, NCX2 influye en la señalización dependiente de la actividad, la excitabilidad de la membrana y la activación de enzimas dependientes de Ca²⁺, integrándose con vías que regulan la transmisión sináptica y la homeostasis neuronal. Las alteraciones del intercambio sodio–calcio pueden perturbar el manejo del Ca²⁺ y la resiliencia celular frente al estrés iónico, lo que convierte a SLC8A2 en un objetivo relevante para estudiar mecanismos vinculados a la disfunción neurológica y la neurodegeneración. Su perfil de expresión enriquecido en neuronas también respalda investigaciones sobre la regulación del Ca²⁺ específica de regiones y tipos celulares en sistemas modelo humanos.

NCX2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC8A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NCX2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC8A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC8A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NCX2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC8A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NCX2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NCX2 en células tumorales con expresión de SLC8A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.