Plasmide CRISPR d'Activation (h) NCX2: sc-403352-ACT

SLC8A2 code pour l’échangeur humain Na⁺/Ca²⁺ NCX2, un antiporteur de la membrane plasmique qui couple le gradient de Na⁺ à l’extrusion de Ca²⁺ ou, dans des conditions électrochimiques spécifiques, à l’entrée de Ca²⁺. En modulant la dynamique du Ca²⁺ cytosolique, NCX2 influence la signalisation dépendante de l’activité, l’excitabilité membranaire et l’activation d’enzymes dépendantes du Ca²⁺, en s’intégrant à des voies qui régulent la transmission synaptique et l’homéostasie neuronale. Une altération de l’échange sodium–calcium peut perturber la gestion du Ca²⁺ et la résistance cellulaire au stress ionique, faisant de SLC8A2 une cible pertinente pour étudier des mécanismes liés aux dysfonctionnements neurologiques et à la neurodégénérescence. Son profil d’expression enrichi dans les neurones soutient également l’étude d’une régulation du Ca²⁺ spécifique des régions et des types cellulaires dans des systèmes modèles humains.

NCX2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC8A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NCX2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC8A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC8A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NCX2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC8A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NCX2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NCX2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC8A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.