NCoA-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401496-ACT

NCOA3 codifica o coativador 3 de receptor nuclear (NCoA-3, também conhecido como SRC-3/AIB1), um coativador transcricional que coordena programas de expressão gênica responsivos a hormônios e a fatores de crescimento. O NCoA-3 interage com receptores nucleares ativados por ligantes e com outros fatores de transcrição para recrutar enzimas modificadoras de cromatina e o maquinário da RNA polimerase II, modulando a acessibilidade da cromatina e o resultado transcricional. Ele participa de vias associadas à sinalização de receptores de esteroides, progressão do ciclo celular, metabolismo e redes inflamatórias de transcrição. Alterações na expressão ou na atividade de NCOA3 têm sido associadas a um controle transcricional desregulado em múltiplos contextos de doença, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos da regulação transcricional.

NCoA-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NCOA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NCoA-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NCOA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NCOA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NCoA-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NCOA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NCoA-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NCoA-3 em células tumorais com expressão de NCOA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.