NCKX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405875

概要

SLC24A5 は NCKX5 をコードしており、NCKX5 はカリウム依存性のナトリウム／カルシウム交換輸送体として、メラノソーム内のイオン恒常性を調節し、色素産生細胞における適切なメラニン生成（メラノジェネシス）を支えます。NCKX5 は、エンドメンブレン系における Ca²⁺ フラックスとイオンバランスを調整することで、メラニン合成、メラノソーム成熟、ならびに色素沈着に関わる経路に影響を与えます。SLC24A5 の遺伝的多型は、ヒトの色素の生理的範囲内の個人差と強く関連しており、その活性変化はメラノサイト生物学の文脈でしばしば検討されます。細胞内輸送やオルガネラ機能にも関与する膜輸送体として、NCKX5 は、イオン輸送が色素形成プログラムをどのように制御するかを研究するための機序的な切り口を提供します。

NCKX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC24A5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC24A5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC24A5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NCKX5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NCKX5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC24A5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NCKX5の機能に不可欠なSLC24A5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC24A5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NCKX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNCKX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC24A5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NCKX5 HDRプラスミド（h）および NCKX5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC24A5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC24A5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。