NAT-11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413259-ACT

Humanes NAA40 kodiert die N‑terminale Acetyltransferase NAT‑11, ein Enzym der GNAT‑Familie, das vor allem dafür bekannt ist, die Nα‑Acetylierung von Histon H4 an Serin 1 zu katalysieren – eine chromatinassoziierte Modifikation, die zur Feinabstimmung von Transkriptionsprogrammen beiträgt. Durch die Modulation der Nukleosomenfunktion und epigenetischer Signalwege verknüpft NAT‑11 eine acetyl‑CoA‑abhängige Acetylierungschemie mit Genomregulation, Zellzyklusprogression und differenzierungsbezogener Genexpression. Eine veränderte NAA40‑Aktivität oder ‑Expression wurde mit dysregulierten Chromatinzuständen in proliferativen sowie Stressantwort‑Kontexten in Verbindung gebracht und ist damit relevant für Studien zur epigenetischen Kontrolle, zum transkriptionellen Remodeling und zu krankheitsassoziierten Genexpressionssignaturen.

NAT-11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NAA40-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NAT-11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NAA40-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NAA40-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NAT-11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NAA40-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NAT-11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NAT-11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NAA40-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.