Plasmide CRISPR d'Activation (h) NAT-10: sc-406713-ACT

Le gène humain **NAT10** code **NAT-10**, une acétyltransférase qui modifie la cytidine dans l’ARN et acétyle des substrats protéiques, contribuant à la biogenèse des ribosomes, au métabolisme de l’ARN et à l’homéostasie nucléolaire. L’activité de NAT-10 a été associée au dépôt de **N4‑acétylcytidine (ac4C)** sur les ARNm et les ARNr, influençant la stabilité des transcrits et le rendement de traduction ; elle participe également à des processus liés à la chromatine et à la réplication qui façonnent la progression du cycle cellulaire. Par ces fonctions, NAT10 s’inscrit au carrefour des voies de réponse au stress et de la régulation des programmes d’expression génique qui gouvernent la prolifération et la différenciation. Une expression ou une activité dérégulée de NAT10 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, notamment des phénotypes de croissance associés aux cancers ainsi que des défauts cellulaires liés au neurodéveloppement ou au vieillissement prématuré, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques.

NAT-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NAT10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NAT-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NAT10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NAT10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NAT-10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NAT10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NAT-10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NAT-10 dans les cellules tumorales présentant une expression de NAT10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.