Na+ CP type IIIα Lentiviral Activation Particles (m): sc-422820-LAC
- Zielspezies: mouse
- 200 µl transduktionsfertige, hoch-titer CRISPR/dCas9 Lentivirale Aktivierungs-Partikel
- Na+ CP type IIIα Lentiviral Activation Particles (m) sind ein SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) gesteuertes System zur Transkriptionsaktivierung eines gewünschten Zielgens, um wirkungsvoll die spezifische Genexpression mittels lentiviraler Transduktion der Zellen zu erhöhen
- Na+ CP type IIIα Lentiviral Activation Particles (m) enthalten die folgenden SAM Aktivierungselemente: deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungs-Domäne VP64, ein MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein und eine zielspezifische 20nt gRNA. Des Weiteren enthalten sind die Resistenzgene für blasticidin, hygromycin und puromycin
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die von Na+ CP type IIIα Lentiviral Activation Plasmid (m) und Na+ CP type IIIα Lentiviral Activation Plasmid (m2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen des Scn3a-Promotors ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Na+ CP type IIIα Lentiviral Activation Particles (m) | sc-422820-LAC | 200 µl | $455.00 |
Scn3a kodiert die spannungsabhängige Natriumkanal-α‑Untereinheit Na+ CP Typ IIIα (Nav1.3) der Maus, ein porenbildendes Membranprotein, das die Auslösung und Weiterleitung von Aktionspotenzialen in erregbaren Zellen unterstützt. Durch die Vermittlung eines schnellen, transienten Na+-Einstroms trägt Nav1.3 zur Depolarisation der neuronalen Membran, zu Feuermustern und zur Erregbarkeit von Netzwerken bei und ist dabei in die Ionhomöostase sowie aktivitätsabhängige Signalwege eingebunden. Die Scn3a-Expression wird während der Entwicklung und nach neuronalen Verletzungen dynamisch reguliert, und eine veränderte Kanalaktivität wurde mit Hyperexzitabilitäts-Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Epilepsie, Schmerzverarbeitung und neuroentwicklungsbedingte Störungen relevant sind. Diese Eigenschaften machen Scn3a zu einem nützlichen Ziel, um in Mausmodellen den Beitrag von Natriumkanälen zur Schaltkreisfunktion und zu erregbarkeitsgetriebenen Krankheitsmechanismen zu untersuchen.
Na+ CP type IIIα Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Scn3a-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.
Na+ CP type IIIα Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Scn3a-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Na+ CP type IIIα-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Scn3a-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.
Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.