Plasmide CRISPR/Cas9 KO NARF (h): sc-407124

Présentation

NARF (nuclear prelamin A recognition factor) code une protéine nucléaire impliquée dans la maturation et le contrôle qualité des précurseurs de la lamine A, contribuant à une organisation correcte de l’enveloppe nucléaire et à la stabilité du génome. En interagissant avec la prélamine A et d’autres composants associés de la lamina nucléaire, NARF participe à des voies qui couplent la protéostasie à l’architecture nucléaire, influençant l’organisation de la chromatine, les réponses aux dommages de l’ADN et la progression du cycle cellulaire. Une perturbation de la maturation de la lamine A et de l’homéostasie de la lamina nucléaire est associée à un spectre de laminopathies et de phénotypes progéroïdes, ce qui fait de NARF un point d’entrée utile pour étudier les mécanismes du stress nucléaire. La fonction de NARF chez l’être humain est également pertinente pour des modèles examinant comment une structure nucléaire altérée affecte les programmes transcriptionnels et les processus cellulaires liés au vieillissement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NARF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NARF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NARF, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NARF à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NARF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NARF pour l'étude de la signalisation de NARF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NARF essentiels à la fonction de NARF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NARF pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NARF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NARF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NARF. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NARF plasmide HDR (h) et le NARF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NARF pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NARF définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.