Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nap-22 (r): sc-437379

Présentation

Nap-22 (également connu sous le nom de BASP1) est une protéine associée à la membrane, enrichie dans les neurones, impliquée dans la régulation de la croissance axonale, de l’extension des neurites et de la fonction synaptique via des interactions avec les phospholipides et des complexes de signalisation à la membrane plasmique. Elle participe à la plasticité neuronale dépendante de l’activité et a été associée à l’organisation du cytosquelette ainsi qu’aux processus de trafic vésiculaire qui modèlent la dynamique du cône de croissance. Nap-22 a également été étudiée dans le contexte de la régulation transcriptionnelle via des interactions nucléaires, reliant des signaux extracellulaires à des programmes d’expression génique pertinents pour la différenciation neuronale. Des altérations de l’expression ou de la localisation de Nap-22 ont été associées à des domaines de recherche sur le neurodéveloppement et les maladies neurodégénératives, où la signalisation membranaire et le remodelage synaptique sont perturbés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nap-22 (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nap-22.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de Nap-22, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de Nap-22
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nap-22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le Nap-22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nap-22 plasmide HDR (r) et le Nap-22 (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.