NAGAT Double Nickase Plasmid (h): sc-401118-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NAGAT Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NAGAT Double-Nickase-Plasmid (h) und NAGAT Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABO abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NAGAT Double Nickase Plasmid (h) | sc-401118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NAGAT Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABO kodiert die N‑Acetylgalactosaminyltransferase (NAGAT), eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die die Übertragung von N‑Acetylgalactosamin auf das H‑Antigen katalysiert und dadurch das A‑Blutgruppenmerkmal auf Glykolipiden und Glykoproteinen erzeugt. Diese Aktivität ist zentral für die terminale Glykosylierung im sekretorischen Weg und prägt Kohlenhydrat-Epitope auf der Zelloberfläche, die Proteintransport, Membranorganisation und Immunerkennung beeinflussen. Genetische Variation im ABO‑Gen liegt den ABO‑Blutgruppenphänotypen zugrunde und wurde mit Unterschieden in der Biologie von Gerinnungsfaktoren sowie in inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht, wodurch die Glykstruktur mit krankheitsrelevanten Prozessen in vaskulären und immunologischen Kontexten verknüpft wird. ABO/NAGAT ist daher ein häufig verwendetes Modell, um zu untersuchen, wie spezifische Glykosyltransferase-Aktivitäten die Glykoproteinfunktion und Zell‑Zell‑Interaktionen modulieren.
NAGAT Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABO-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABO abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABO-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABO-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.