NaDC-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-416648-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NaDC-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NaDC-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und NaDC-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC13A3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NaDC-3: sc-293347
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NaDC-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416648-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NaDC-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416648-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC13A3 kodiert den humanen NaDC-3, einen natriumabhängigen Dicarboxylat-Transporter (SLC13-Familie) in der Plasmamembran, der den Na⁺-Gradienten an die Aufnahme von Intermediaten des Krebs-Zyklus wie Succinat, α‑Ketoglutarat und Citrat koppelt. Durch die Regulierung der intrazellulären Verfügbarkeit von Dicarboxylaten unterstützt NaDC-3 den zentralen Kohlenstoffstoffwechsel, anaplerotische Prozesse und die Redoxhomöostase und kann zelluläre Antworten auf metabolischen Stress beeinflussen. Der Transporter wird besonders in der Nieren- und Leberphysiologie untersucht, wo organische Anionenhandhabung und Energiestoffwechsel zusammenlaufen; eine veränderte SLC13A3-Aktivität wurde zudem in Zusammenhängen metabolischer Dysregulation und in Modellen von Organschädigungen untersucht. Als „Gatekeeper“ für den Dicarboxylatfluss ist NaDC-3 auch für Signalwege relevant, die Metabolitentransport mit Signalgebung verknüpfen, einschließlich succinatassoziierter Entzündungs- und hypoxieadaptiver Prozesse.
NaDC-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC13A3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC13A3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC13A3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC13A3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.