Plásmido CRISPR de Activación (h) NaDC-1: sc-407586-ACT

SLC13A2 codifica el cotransportador de dicarboxilatos dependiente de sodio NaDC-1 (SLC13A2), un transportador de la membrana plasmática que acopla los gradientes de Na⁺ a la captación de citrato, succinato y otros intermediarios del ciclo de Krebs. En epitelios polarizados, NaDC-1 contribuye a la reabsorción de sustratos metabólicos y a la disponibilidad intracelular de citrato, conectando el transporte de membrana con el metabolismo mitocondrial, el equilibrio redox y las rutas biosintéticas. Al modular las reservas de citrato en el citosol, SLC13A2 puede influir en la producción de acetil-CoA y en la síntesis lipídica posterior, así como en procesos de acetilación epigenética. Las alteraciones en la actividad de NaDC-1 y en el manejo de dicarboxilatos se han investigado en contextos relacionados con la fisiología del transporte tubular renal, la desregulación metabólica y los trastornos de la homeostasis de aniones orgánicos.

NaDC-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC13A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NaDC-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC13A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC13A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NaDC-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC13A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NaDC-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NaDC-1 en células tumorales con expresión de SLC13A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.