NaBC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405950-ACT

BCAS1 (breast carcinoma amplified sequence 1) codifica la proteina umana NaBC1, un fattore citoplasmatico e associato alla membrana, arricchito nella glia mielinizzante e frequentemente utilizzato come marcatore della dinamica della linea oligodendrogliale. L’espressione di BCAS1 è collegata a programmi che governano la differenziazione gliale, il rimodellamento di membrana e l’organizzazione del citoscheletro, a supporto della formazione e del mantenimento della mielina nel sistema nervoso centrale. Livelli deregolati di BCAS1 sono stati riportati in ambito oncologico a causa di amplificazione genomica e di un controllo trascrizionale alterato, e nella ricerca neurologica, dove variazioni nelle popolazioni BCAS1-positive riflettono cambiamenti nella mielinizzazione e nell’integrità della sostanza bianca. Queste caratteristiche rendono BCAS1 un nodo utile per studiare la regolazione trascrizionale nella maturazione gliale, le transizioni di stato di linea e il rimodellamento delle cellule mielinizzanti associato alle malattie.

NaBC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCAS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NaBC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCAS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCAS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NaBC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCAS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NaBC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NaBC1 nelle cellule tumorali con espressione di BCAS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.