N4BP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429812

Übersicht

N4bp1 (N4BP1; NEDD4-Bindungsprotein 1) kodiert einen zytosolischen Regulator der angeborenen Immun-Signalübertragung, der mit ubiquitinabhängigen Signalwegen assoziiert ist und inflammatorische Transkriptionsprogramme moduliert. In Immunzellen der Maus wurde N4BP1 mit der Kontrolle der NF-κB-Signalwegaktivität stromabwärts der Signalübertragung über Mustererkennungsrezeptoren in Verbindung gebracht, wodurch Zytokininduktion und stimulusabhängige Aktivierungszustände beeinflusst werden. Über seine Interaktionen mit Komponenten der Ubiquitinierungsmaschinerie ist N4BP1 in der Lage, die Stabilität von Signalkomplexen, den Proteinumsatz und nachgeschaltete transkriptionelle Antworten zu beeinflussen. Eine dysregulierte N4BP1-Funktion ist daher relevant für die Forschung zur Immunhomöostase, zu infektionsgetriebener Entzündung und zu Modellen immunvermittelter Pathologien.

Das N4BP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des N4bp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des N4bp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von N4bp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die N4BP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von N4bp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der N4BP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf N4bp1-Exone abzielen, die für die N4BP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere N4bp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom N4BP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom N4BP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des N4bp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das N4BP1 HDR-Plasmid (m) und N4BP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von N4bp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten N4bp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.