Plásmido Doble Nickase (h) Myosin X: sc-402204-NIC

MYO10 codifica la miosina X, un motor no convencional basado en actina, enriquecido en las puntas de los filopodios, donde favorece el inicio y la elongación de los filopodios, el transporte de carga y la dinámica del borde celular. La miosina X interactúa con redes reguladoras de la actina y con la maquinaria de adhesión, contribuyendo a procesos como el tráfico de integrinas, la protrusión de membrana y la migración celular direccional. A través de estas funciones, influye en la remodelación del citoesqueleto, las interacciones célula–matriz y las vías de transporte intracelular importantes para la morfogénesis y la motilidad. En la literatura, la actividad desregulada de MYO10 y el comportamiento alterado de los filopodios se han vinculado con fenotipos celulares invasivos y con cambios en programas de señalización y adhesión estudiados en contextos de cáncer y neurobiología.

Myosin X El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MYO10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MYO10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MYO10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MYO10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.