Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myosin VIIB: sc-409183-ACT

Le gène humain **MYO7B** code la **myosine VIIB**, une protéine motrice dépendante de l’actine qui soutient l’organisation du cytosquelette et les processus de transport intracellulaire liés à la polarité cellulaire et au maintien de domaines membranaires spécialisés. En tant que membre de la famille des myosines non conventionnelles, elle est impliquée dans la dynamique des filaments d’actine, le trafic vésiculaire et des événements de signalisation organisés par des plateformes d’échafaudage, qui façonnent l’architecture épithéliale. La dérégulation du transport dépendant de l’actine et des voies de polarité est fréquemment étudiée dans des contextes tels que les défauts de fonction barrière et les altérations de l’organisation tissulaire, notamment dans les systèmes gastro-intestinal et sensoriel. La modulation de **MYO7B** est donc utile pour analyser comment les moteurs à actine coordonnent le trafic, les complexes d’adhérence et le remodelage des jonctions dans les cellules humaines.

Myosin VIIB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYO7B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myosin VIIB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYO7B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYO7B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myosin VIIB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYO7B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myosin VIIB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myosin VIIB dans les cellules tumorales présentant une expression de MYO7B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.