Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myosin If: sc-403977-ACT

MYO1F code la myosine If, une protéine motrice dépendante de l’actine enrichie dans les cellules hématopoïétiques, qui soutient la dynamique membranaire, le remodelage de l’actine corticale et la génération de force lors de l’adhésion et de la migration. La myosine If contribue au trafic vésiculaire, à la formation de la coupe phagocytaire et à l’organisation du cytosquelette associée aux intégrines, reliant la motilité dépendante de l’ATP à la polarité et à la signalisation des cellules immunitaires. Une expression ou une fonction altérée de MYO1F a été associée à une motilité leucocytaire dérégulée et à des réponses inflammatoires, ce qui en fait un élément pertinent pour l’étude de l’homéostasie immunitaire et des mécanismes des maladies à médiation immunitaire. Son activité s’articule avec des voies de régulation de l’actine qui coordonnent l’endocytose, la chimiotaxie et l’architecture de la synapse immunologique.

Myosin If Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYO1F sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myosin If Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYO1F dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYO1F, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myosin If. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYO1F natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myosin If au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myosin If dans les cellules tumorales présentant une expression de MYO1F silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.