myogenin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421806

Übersicht

Myog kodiert Myogenin, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der downstream von MYOD1 und MYF5 wirkt und die terminale Differenzierung der Skelettmuskulatur antreibt. Myogenin bindet an E-Box-Motive und koordiniert Transkriptionsprogramme, die den Zellzyklus-Ausstieg von Myoblasten, die Myotubenbildung sowie die Aktivierung sarkomerer und muskelstruktureller Gene steuern. Es fungiert innerhalb zentraler myogener Regulationsnetzwerke und steht in Wechselwirkung mit Chromatin-Remodeling sowie MAPK-/PI3K-gekoppelten Signaleingängen, die die Linienfestlegung modulieren. Eine Fehlregulation myogenin-assoziierter Transkriptionsprogramme ist relevant für Studien zu beeinträchtigter Myogenese, Muskelregeneration und Mechanismen neuromuskulärer Erkrankungen in Mausmodellsystemen.

Das myogenin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Myog-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Myog-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Myog nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die myogenin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Myog-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der myogenin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Myog-Exone abzielen, die für die myogenin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Myog-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom myogenin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom myogenin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Myog-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das myogenin HDR-Plasmid (m) und myogenin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Myog-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Myog-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.