Plásmido CRISPR de Activación (h) MYH3: sc-400555-ACT

MYH3 codifica la cadena pesada de miosina del músculo esquelético embrionario, un componente esencial del motor del filamento grueso que convierte la hidrólisis de ATP en fuerza contráctil. Desempeña un papel central en la miofibrilogénesis y en la organización del sarcómero durante la miogénesis temprana, coordinando las interacciones actina–miosina necesarias para la formación y maduración de las fibras musculares. La expresión de MYH3 se integra con programas transcripcionales del desarrollo y con vías de ensamblaje del citoesqueleto que determinan la arquitectura muscular y las propiedades contráctiles. La variación genética o la expresión desregulada de MYH3 se ha relacionado con trastornos congénitos del desarrollo del músculo esquelético caracterizados por contractilidad deficiente y un patrón musculoesquelético anómalo, lo que lo convierte en una diana relevante para el estudio de miopatías del desarrollo.

MYH3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYH3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYH3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYH3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYH3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH3 en células tumorales con expresión de MYH3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.