Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYH13: sc-400602-ACT

MYH13 code la chaîne lourde de myosine 13, une protéine motrice des muscles squelettiques à contraction rapide qui assure la contraction dépendante de l’actine grâce au cycle des ponts actine-myosine, entraîné par l’activité ATPasique, au sein du sarcomère. En tant que composant de l’appareil contractile myofibrillaire, MYH13 contribue à la spécialisation des fibres musculaires et régule la production de force ainsi que la vitesse de raccourcissement dans le muscle strié. Une expression altérée ou une dérégulation des programmes de myosines sarcomériques est pertinente pour les études du développement musculaire, de la transition entre types de fibres et des voies de remodelage qui influencent la physiologie neuromusculaire. MYH13 constitue donc un outil moléculaire utile pour étudier les réseaux transcriptionnels qui gouvernent la structure et la fonction du muscle squelettique, notamment la différenciation myogénique et les modules géniques associés à la contractilité.

MYH13 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYH13 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH13 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYH13 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYH13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH13. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYH13 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH13 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH13 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYH13 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.