Plasmide CRISPR d'Activation (m) Myc: sc-421770-ACT

Myc (c-Myc) est un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique à fermeture éclair leucine, qui coordonne de vastes programmes d’expression génique contrôlant la croissance cellulaire, l’accumulation de biomasse, la progression du cycle cellulaire, le métabolisme et la biogenèse des ribosomes dans les cellules de souris. Il agit en aval de voies de signalisation mitogènes telles que Wnt/β-caténine, les récepteurs à activité tyrosine kinase et MAPK/PI3K, et il module la chromatine ainsi que l’élongation transcriptionnelle via des interactions avec MAX et d’autres cofacteurs. L’activité de Myc influence les réponses au stress de réplication de l’ADN, l’apoptose et les choix de différenciation, l’associant à la transformation oncogénique et au maintien tumoral dans divers modèles de cancer. Une expression dérégulée de Myc est également pertinente pour des phénotypes du développement et des paradigmes de régénération tissulaire, où la prolifération et l’engagement de lignée sont étroitement régulés.

Myc Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Myc sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myc Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Myc dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Myc, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myc. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Myc natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myc au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myc dans les cellules tumorales présentant une expression de Myc silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.