Plasmide CRISPR/Cas9 KO MuRF1 (h): sc-400797

Présentation

TRIM63 code pour l’E3 ubiquitine‑ligase spécifique du muscle MuRF1, une protéine à doigt RING qui se localise aux structures sarcomériques et favorise le renouvellement, dépendant de l’ubiquitine, de protéines contractiles et régulatrices. MuRF1 agit au sein du système ubiquitine–protéasome et coopère avec l’autophagie ainsi qu’avec les voies de signalisation de réponse au stress pour remodeler les myofibrilles lors de privation nutritionnelle, de dénervation et de signaux inflammatoires. Sa régulation transcriptionnelle et post‑traductionnelle s’inscrit à l’interface des programmes d’atro‑gènes pilotés par FOXO, de la signalisation insuline/IGF‑1–AKT et des voies cataboliques associées à NF‑κB. Une activité dérégulée de TRIM63 est liée à des phénotypes d’atrophie du muscle squelettique et à une homéostasie musculaire altérée, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de la protéostasie, du métabolisme et des mécanismes de fonte musculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MuRF1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIM63 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIM63, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIM63 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MuRF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIM63 pour l'étude de la signalisation de MuRF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRIM63 essentiels à la fonction de MuRF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIM63 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MuRF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MuRF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIM63. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MuRF1 plasmide HDR (h) et le MuRF1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIM63 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIM63 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.