Multimerin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404741-ACT

MMRN1 codifica a multimerina-1, uma grande glicoproteína multimérica ligada por pontes dissulfeto, armazenada nos grânulos α das plaquetas e nos corpos de Weibel–Palade das células endoteliais, sendo liberada após a ativação celular. A multimerina-1 localiza-se na matriz extracelular e na superfície das plaquetas, onde contribui para a adesão plaquetária e para a estabilização das respostas hemostáticas por meio de interações com parceiros associados à coagulação e à matriz. Essa biologia conecta o MMRN1 a vias que regulam a degranulação plaquetária, a homeostase vascular e a formação de trombos sob cisalhamento. Alterações na expressão ou na distribuição de MMRN1 têm sido investigadas em fenótipos hemorrágicos e trombóticos e como marcador de ativação plaquetária/endotelial em contextos de doenças inflamatórias e vasculares.

Multimerin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMRN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Multimerin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMRN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMRN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Multimerin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMRN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Multimerin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Multimerin-1 em células tumorais com expressão de MMRN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.