Plasmide Double Nickase (h) Mucin 5B/MUC5B: sc-401077-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Mucin 5B/MUC5B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Mucin 5B/MUC5B Double Nickase (h) et le plasmide Mucin 5B/MUC5B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MUC5B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Mucin 5B/MUC5B Antibody (5B#19-2E): sc-21768
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Mucin 5B/MUC5B | sc-401077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Mucin 5B/MUC5B | sc-401077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUC5B code la mucine 5B, une mucine sécrétée de haut poids moléculaire, formant un gel, fortement O‑glycosylée, qui polymérise via des liaisons disulfure pour constituer la barrière de mucus des voies aériennes et d’autres épithéliums muqueux. Cette barrière régule la clairance mucociliaire, l’hydratation et la défense innée en modulant les propriétés viscoélastiques du mucus et en influençant les interactions avec les microbes et les particules. L’expression de MUC5B est contrôlée par des programmes de différenciation épithéliale et des voies de signalisation inflammatoires, notamment des réponses transcriptionnelles induites par les cytokines et le traitement sécrétoire RE–Golgi qui soutient la biosynthèse des mucines. Des niveaux dérégulés de MUC5B ou des propriétés du mucus altérées ont été impliqués dans les maladies respiratoires chroniques et la pathologie pulmonaire fibrosante, ce qui en fait une cible majeure pour l’étude de l’homéostasie épithéliale et des mécanismes de défense des muqueuses.
Mucin 5B/MUC5B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MUC5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MUC5B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MUC5B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MUC5B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.