Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 5B/MUC5B (h): sc-401077

Présentation

MUC5B code pour la mucine 5B, une mucine sécrétée de haut poids moléculaire, formant un gel, qui constitue un composant structural majeur du mucus des voies aériennes et de la salive. Grâce à une O‑glycosylation étendue et à sa polymérisation, MUC5B contribue à la clairance mucociliaire, au piégeage des agents pathogènes et au maintien de l’homéostasie de la barrière épithéliale, et son expression est régulée par des programmes inflammatoires et de différenciation dans les épithéliums sécrétoires. Une abondance ou des propriétés rhéologiques de MUC5B altérées sont associées à un transport du mucus dérégulé et à un remodelage chronique des voies aériennes, et des modifications génétiques et d’expression ont été reliées à la fibrose pulmonaire et à des phénotypes de maladies pulmonaires muco‑obstructives. En tant que glycoprotéine sécrétée fournissant de nombreux readouts, MUC5B est largement étudiée dans les contextes de la différenciation épithéliale, du traitement sécrétoire RE/Golgi et de la signalisation de défense innée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 5B/MUC5B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MUC5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MUC5B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MUC5B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mucin 5B/MUC5B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MUC5B pour l'étude de la signalisation de Mucin 5B/MUC5B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MUC5B essentiels à la fonction de Mucin 5B/MUC5B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MUC5B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mucin 5B/MUC5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mucin 5B/MUC5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MUC5B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mucin 5B/MUC5B plasmide HDR (h) et le Mucin 5B/MUC5B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MUC5B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MUC5B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.