Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mucin 5B/MUC5B: sc-401077-ACT

MUC5B code la mucine 5B, une mucine gélifiante de haut poids moléculaire, fortement O‑glycosylée et sécrétée pour former la barrière de mucus viscoélastique à la surface des épithéliums des voies aériennes et d’autres muqueuses. MUC5B contribue à la clairance mucociliaire en régulant l’hydratation du mucus, la réticulation des polymères et la capture des agents pathogènes, en s’intégrant aux programmes de différenciation épithéliale et aux signaux inflammatoires qui remodèlent l’environnement de surface extracellulaire. Son expression est influencée par des voies dépendantes des cytokines ainsi que par le traitement sécrétoire du RE/Golgi, qui coordonnent la biosynthèse et l’export des mucines. La dérégulation des niveaux de MUC5B et les altérations de la rhéologie du mucus sont largement étudiées dans l’inflammation chronique des voies aériennes et la biologie de la fibrose pulmonaire, ce qui en fait une cible fréquente pour la modélisation mécanistique de l’homéostasie épithéliale.

Mucin 5B/MUC5B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUC5B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mucin 5B/MUC5B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUC5B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUC5B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mucin 5B/MUC5B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUC5B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mucin 5B/MUC5B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mucin 5B/MUC5B dans les cellules tumorales présentant une expression de MUC5B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.