Plásmido CRISPR de Activación (h) Mucin 17: sc-404622-ACT

MUC17 codifica la mucina 17, una mucina anclada a la membrana y fuertemente O‑glicosilada, enriquecida en superficies epiteliales donde contribuye al glucocálix y a la barrera mucosa. Al sostener la integridad de la membrana apical, las interacciones célula‑célula y la protección frente al estrés químico y microbiano, MUC17 influye en la homeostasis epitelial, la polaridad y procesos asociados a la reparación de heridas. La expresión y la glicosilación alteradas de las mucinas se observan con frecuencia en patologías gastrointestinales y otras enfermedades epiteliales, lo que vincula la regulación de MUC17 con la inflamación, la disfunción de la barrera y la biología tumoral. Como mucina asociada a la superficie, MUC17 también es relevante para estudios de señalización tipo receptor en la membrana plasmática y de la modulación dependiente del contexto de programas de diferenciación epitelial.

Mucin 17 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MUC17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mucin 17 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MUC17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MUC17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mucin 17. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MUC17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mucin 17 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mucin 17 en células tumorales con expresión de MUC17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.