Plasmide CRISPR d'Activation (m) MT-MMP-4: sc-423912-ACT

Le gène murin **Mmp17** code la métalloprotéinase matricielle de type membranaire 4 (**MT-MMP-4**), une endopeptidase membranaire ancrée et zinc-dépendante qui remodèle la matrice extracellulaire péricellulaire par clivage de protéines de la matrice et modulation de substrats à la surface cellulaire. MT-MMP-4 contribue à des cascades protéolytiques impliquant l’activation des MMP, le renouvellement de la MEC et la dynamique de la membrane basale, influençant la migration et l’adhérence cellulaires ainsi que la morphogenèse tissulaire. En façonnant l’architecture stromale et la signalisation dépendante des protéases, **Mmp17** est pertinent pour l’étude de la fibrose, du remodelage associé à l’inflammation et de la biologie du microenvironnement tumoral, où une protéolyse altérée peut affecter les programmes d’invasion et d’angiogenèse.

MT-MMP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mmp17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MT-MMP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mmp17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mmp17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MT-MMP-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mmp17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MT-MMP-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MT-MMP-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mmp17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.