MT-MMP-1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421671-ACT

Das murine Mmp14 kodiert die membrantyp-1-Matrix-Metalloproteinase (MT-MMP-1), eine perizelluläre Kollagenase, die die extrazelluläre Matrix durch Spaltung fibrillärer Kollagene und Aktivierung von Pro-MMP2 umgestaltet und so Zellmigration, Invasion und Gewebemorphogenese koordiniert. MT-MMP-1 ist in Integrin-Signalwege, die Dynamik fokaler Adhäsionen und die Bioverfügbarkeit von Wachstumsfaktoren eingebunden und reguliert dadurch epithel–mesenchymale Interaktionen, angiogenes Sprosswachstum und Wundheilung. In Immun- und Stromakompartimenten formt die Mmp14-Aktivität inflammatorische Mikroumgebungen und die Matrixsteifigkeit, was die Aktivierung von Myofibroblasten und fibrotisches Remodeling beeinflusst. Eine fehlregulierte Mmp14-Expression oder -Aktivität wird mit pathologischem Matrixumsatz in Modellen der Krebsprogression, bei Arthritis und bei Organfibrosen in Verbindung gebracht und macht Mmp14 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung extrazellulärer Proteolyse und Mechanobiologie.

MT-MMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Mmp14-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MT-MMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Mmp14-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Mmp14-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MT-MMP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Mmp14-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MT-MMP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MT-MMP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Mmp14-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.