MT-MMP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401028-ACT

MMP14 kodiert die membranständige Matrix‑Metalloproteinase 1 (MT‑MMP‑1), eine an der Zelloberfläche lokalisierte Protease, die den perizellulären Umbau der extrazellulären Matrix (ECM) vorantreibt, indem sie Kollagene, Laminine und andere Matrixbestandteile spaltet und zudem Pro‑MMP2 aktiviert. Über die Regulation des Turnovers fokaler Adhäsionen, der Integrin‑Signalgebung sowie epithelial‑mesenchymaler Dynamiken unterstützt MT‑MMP‑1 Zellmigration und Invasionsprogramme, die für Gewebemorphogenese und Wundumbau zentral sind. Ihre Aktivität überschneidet sich mit TGF‑β‑ und Wachstumsfaktor‑Signalwegen, um Proteolyse mit zytoskelettaler Reorganisation und Matrixablagerung zu koordinieren. Eine fehlregulierte MMP14‑Expression und die proteolytische Funktion von MT‑MMP‑1 wurden mit invasiver Tumorbiologie, fibrotischem Remodeling und entzündlich bedingten Gewebeschäden in Verbindung gebracht, weshalb sie häufig als zentraler Ansatzpunkt genutzt wird, um ECM‑abhängige Signalwege und die Kontrolle des Zellverhaltens durch das Mikromilieu zu untersuchen.

MT-MMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MMP14-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MT-MMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MMP14-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MMP14-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MT-MMP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MMP14-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MT-MMP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MT-MMP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MMP14-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.