Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
MSG1 Double Nickase Plasmid (m): sc-419669-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MSG1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MSG1 Double-Nickase-Plasmid (m) und MSG1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cited1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MSG1: sc-393585
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MSG1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419669-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MSG1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419669-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Maus-Cited1 kodiert MSG1, einen transkriptionellen Ko-Regulator, der Genexpressionsprogramme moduliert, welche Zellschicksalsentscheidungen und Differenzierung steuern. MSG1 interagiert mit der nukleären Transkriptionsmaschinerie, einschließlich CBP/p300-assoziierter Signalwege, um eine chromatinabhängige Regulation von Entwicklungs- und stressresponsiven Genen zu beeinflussen. In embryonalen sowie Stamm-/Vorläuferzell-Kontexten trägt Cited1 zur Lineagespezifikation und Gewebemusterbildung bei, während es in somatischen Kontexten Signalausgaben aus Signalwegen prägen kann, die auf die transkriptionelle Kontrolle konvergieren. Eine fehlregulierte Aktivität der CITED-Familie wurde in der Literatur mit veränderten Differenzierungszuständen und onkogenen Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht, was Cited1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Genregulation macht.
MSG1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cited1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cited1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cited1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cited1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.