MSG1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404984-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MSG1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MSG1 Double-Nickase-Plasmid (h) und MSG1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CITED1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MSG1: sc-101002
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MSG1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404984-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MSG1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404984-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CITED1 (auch bekannt als MSG1) kodiert einen nukleären transkriptionellen Ko‑Regulator, der an den CBP/p300‑Acetyltransferase‑Komplex bindet, um Genexpressionsprogramme nachgeschaltet an entwicklungsbedingte und hormonelle Signale zu modulieren. Es ist an der transkriptionellen Kontrolle beteiligt, die mit der Dynamik der TGF‑β/BMP‑Signalgebung verknüpft ist, an hypoxieassoziierten Netzwerken über Crosstalk mit dem HIF‑Signalweg sowie an der Regulation von Zellschicksalsentscheidungen einschließlich Differenzierung und Proliferation. In menschlichen Zellen wurde eine veränderte CITED1‑Expression mit dysregulierten Transkriptionszuständen in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, insbesondere bei Krebs und bei Erkrankungen mit aberranter Wachstumsfaktor‑Signalgebung. Diese Eigenschaften machen CITED1/MSG1 zu einem nützlichen Ziel, um Enhancer‑Promotor‑Regulation und signalabhängige transkriptionelle Umprogrammierung zu untersuchen.
MSG1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CITED1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CITED1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CITED1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CITED1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.