Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRS2L (h): sc-410061

Présentation

Le gène humain **MRS2** code **MRS2L**, un canal mitochondrial de **Mg2+** situé dans la membrane interne, essentiel au maintien de l’homéostasie du magnésium dans la matrice, au soutien de la phosphorylation oxydative et à l’amortissement du stress bioénergétique. En régulant des activités dépendantes du Mg2+, telles que la gestion de l’ATP et la fonction des enzymes mitochondriales, MRS2L influence le potentiel de membrane mitochondrial, le couplage du calcium et l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène. La perturbation du transport ionique mitochondrial et de la disponibilité du Mg2+ est impliquée dans des défauts du métabolisme mitochondrial et des réponses au stress, fréquemment étudiés dans la neurodégénérescence, les troubles cardiométaboliques et l’adaptation des cellules cancéreuses. MRS2L constitue donc un point d’entrée utile pour explorer la signalisation mitochondriale, la plasticité métabolique et les voies de contrôle qualité des organites.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRS2L (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MRS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MRS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MRS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRS2L.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MRS2 pour l'étude de la signalisation de MRS2L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MRS2 essentiels à la fonction de MRS2L
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MRS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MRS2L plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MRS2L plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MRS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MRS2L plasmide HDR (h) et le MRS2L (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MRS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MRS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.