Plasmide Double Nickase (h) MRNIP: sc-412131-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MRNIP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MRNIP Double Nickase (h) et le plasmide MRNIP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MRNIP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MRNIP Antibody (H-11): sc-390012
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MRNIP | sc-412131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MRNIP | sc-412131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MRNIP (protéine interagissant avec MRE11‑RAD50‑NBS1) est un facteur nucléaire impliqué dans la réponse aux dommages de l’ADN par son association fonctionnelle avec le complexe MRN, qui coordonne la détection et le traitement des cassures double brin de l’ADN. En modulant la signalisation dépendante de MRN et la dynamique de résection des extrémités, MRNIP contribue à la stabilité du génome en situation de stress réplicatif et influence l’activation des points de contrôle ainsi que le choix des voies de réparation. La perturbation des composants de la voie MRN est largement associée à des phénotypes d’instabilité chromosomique et à une sensibilité modifiée aux agents génotoxiques, ce qui fait de MRNIP un nœud utile pour étudier l’organisation des réseaux de réparation de l’ADN. Les recherches sur MRNIP sont pertinentes pour comprendre les mécanismes à l’origine de l’accumulation de mutations, de l’aneuploïdie et des défauts du cycle cellulaire observés dans divers contextes pathologiques.
MRNIP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MRNIP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MRNIP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MRNIP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MRNIP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.