MRGX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r): sc-437369

Übersicht

MRGX2 (auch als Mitglied der MRGPRX2-Familie bezeichnet) kodiert einen Mas-verwandten G‑Protein-gekoppelten Rezeptor, der an der neuroimmunen Kommunikation und an reizabhängiger Signalübertragung beteiligt ist. Bei Nagern werden MRGX2‑ähnliche Rezeptoren mit Prozessen in Verbindung gebracht, die sensorische Neuronen und Mastzellen betreffen, und koppeln an nachgeschaltete Signalwege, welche die intrazelluläre Kalziummobilisierung, Degranulationsprogramme und die Freisetzung entzündlicher Mediatoren regulieren. Als GPCR beeinflusst MRGX2 Signaltransduktionsnetzwerke an der Zelloberfläche, die sich mit stress- und schmerzbezogener neurogener Entzündung überschneiden, und ist damit relevant für mechanistische Untersuchungen zu Juckreiz, Nozizeption und pseudoallergischen Reaktionen. Eine fehlregulierte Aktivität dieser Rezeptorfamilie wurde in präklinischen Modellen mit veränderter Mastzellreaktivität und entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht.

Das MRGX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des -Gens in rat-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des -Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MRGX2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von -defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MRGX2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf -Exone abzielen, die für die MRGX2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere -Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MRGX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) und vom MRGX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des -Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MRGX2 HDR-Plasmid (r) und MRGX2 HDR-Plasmid (r2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von -Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten -Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.