MPZL2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420242-ACT

Das Mausgen *Mpzl2* kodiert MPZL2, ein Transmembranprotein der Immunglobulin-Superfamilie, das an Zell-Zell-Adhäsion und der Organisation epithelialer Barrieren beteiligt ist. MPZL2 wurde mit rezeptorassoziierten Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, die die Zytoskelettdynamik, kontaktabhängige Wachstumskontrolle und Gewebearchitektur beeinflussen, mit nachgeschalteten Effekten auf Proliferations- und Differenzierungsprogramme. In murinen Systemen wird eine veränderte MPZL2-Aktivität genutzt, um Mechanismen der epithelialen Homöostase und von Stressantworten zu untersuchen, einschließlich Signalwegen, die für entzündungsassoziiertes Remodeling und neoplastische Transformation relevant sind. Die Modulation der *Mpzl2*-Expression bietet daher einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um adhäsionsabhängige Signalgebung und die Regulation durch die Mikroumgebung in vivo und in Zellkultur zu untersuchen.

MPZL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Mpzl2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MPZL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Mpzl2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Mpzl2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MPZL2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Mpzl2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MPZL2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MPZL2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Mpzl2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.