MPZL1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407478-ACT

MPZL1 (myelin protein zero-like 1), auch bekannt als PZR, kodiert ein transmembranöses Protein aus der Immunglobulin-Superfamilie, das als Gerüstprotein für die Signalübertragung durch Tyrosinphosphatasen dient, insbesondere über SHP2 (PTPN11). Über seine zytoplasmatischen ITIM-Motive moduliert MPZL1 phosphorylierungsabhängige Signalwege, die Zelladhäsion, Ausbreitung, Migration und das Remodelling des Zytoskeletts steuern, und integriert dabei Signale von Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie Interaktionen mit der extrazellulären Matrix. Mit MPZL1 assoziierte Signalübertragung wurde mit der Regulation der Dynamik fokaler Adhäsionen und der Aktivität des MAPK/ERK-Signalwegs in Verbindung gebracht und beeinflusst proliferative und motile Phänotypen in unterschiedlichen zellulären Kontexten. Eine dysregulierte MPZL1-Expression oder -Signalgebung wurde bei onkologisch relevanten Prozessen wie Invasion und metastaseassoziiertem Verhalten beschrieben, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien von Signalnetzwerken und adhesionsgetriebenen Phänotypen unterstützt.

MPZL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MPZL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MPZL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MPZL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MPZL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MPZL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MPZL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MPZL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MPZL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MPZL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.