Plasmide CRISPR/Cas9 KO MPST (h): sc-401643

Présentation

La MPST humaine (3‑mercaptopyruvate sulfurtransférase) est une sulfurtransférase mitochondriale et cytosolique qui catalyse la conversion du 3‑mercaptopyruvate en pyruvate tout en générant des espèces soufrées réactives et en contribuant au métabolisme endogène du sulfure d’hydrogène (H2S) et des persulfures. La MPST intervient dans l’homéostasie rédox cellulaire, l’utilisation des acides aminés soufrés et la régulation de la persulfidation des protéines, avec des effets en aval sur la bioénergétique mitochondriale et la signalisation de réponse au stress. Une activité MPST altérée a été associée à une sensibilité au stress oxydatif et à une dérégulation métabolique, et les modifications de l’expression de MPST ou de la signalisation soufrée sont étudiées dans des contextes tels que la neurobiologie, la signalisation cardiovasculaire et l’adaptation des cellules cancéreuses. En tant que composante du réseau plus large de transsulfuration et des espèces soufrées réactives, la MPST constitue un point d’entrée mécanistique pour disséquer la signalisation dépendante des thiols et la fonction mitochondriale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MPST (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MPST dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MPST, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MPST à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MPST.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MPST pour l'étude de la signalisation de MPST, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MPST essentiels à la fonction de MPST
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MPST pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MPST plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MPST plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MPST. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MPST plasmide HDR (h) et le MPST (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MPST pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MPST définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.