Plásmido CRISPR de Activación (h) mPRε: sc-408586-ACT

PAQR9 codifica el receptor de progesterona de membrana épsilon (mPRε), un miembro de la familia de receptores de progestinas y adipoQ implicado en la señalización esteroidea no clásica en la membrana plasmática. mPRε se ha vinculado con una transducción de señales rápida desencadenada por la progesterona que puede influir en vías de segundos mensajeros, incluida la modulación de la dinámica de cAMP/PKA y MAPK/ERK, con efectos posteriores sobre la proliferación celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. En tejidos humanos, se ha observado la expresión de PAQR9 en contextos sensibles a hormonas, lo que respalda funciones en la biología reproductiva y en una regulación endocrina más amplia. Las vías de señalización de progestinas desreguladas que involucran receptores de la familia PAQR son relevantes para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por hormonas en biología del cáncer, homeostasis metabólica y función neuroendocrina.

mPRε El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAQR9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mPRε El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAQR9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAQR9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mPRε. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAQR9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mPRε en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mPRε en células tumorales con expresión de PAQR9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.