Plasmide Double Nickase (h) MOF: sc-401891-NIC

KAT8 code pour l’histone acétyltransférase MOF (MYST1), une enzyme clé responsable de l’écriture de la marque H4K16ac, qui module l’accessibilité de la chromatine et la production transcriptionnelle. MOF agit au sein de complexes multiprotéiques afin de coordonner des programmes d’expression génique liés à la réplication de l’ADN, à la signalisation des dommages à l’ADN et au maintien de la stabilité du génome, notamment via des interactions avec les voies ATM/DDR. En contrôlant l’architecture des nucléosomes et le recrutement, dépendant de l’acétylation, de régulateurs de la chromatine, MOF influence la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. La dérégulation de KAT8/MOF et l’altération des profils d’acétylation de H4K16 ont été associées à des états épigénétiques aberrants observés dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, ce qui en fait un nœud mécanistique utile pour la recherche sur la chromatine et l’intégrité du génome.

MOF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KAT8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KAT8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KAT8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KAT8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.