MMP9 Double Nickase Plasmid (h): sc-400083-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MMP9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MMP9 Double-Nickase-Plasmid (h) und MMP9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MMP9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MMP9: sc-393859
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MMP9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400083-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MMP9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400083-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MMP9 (Matrix-Metallopeptidase 9) kodiert eine sekretierte, zinkabhängige Endopeptidase, die Komponenten der extrazellulären Matrix wie Kollagen Typ IV und Gelatine abbaut und damit Gewebeumbau sowie den Turnover der Basalmembran koordiniert. Die MMP9-Aktivität wird durch die Aktivierung ihrer Zymogenform und durch die Hemmung mittels TIMPs reguliert, wodurch sie in Protease-Netzwerke eingebunden ist, die Zellmigration, Adhäsionsdynamik und inflammatorische Signalübertragung modulieren. MMP9 ist an Prozessen wie Angiogenese, Leukozyten-Extravasation und Wundheilung beteiligt und wird häufig im Kontext von ECM-Remodeling-Programmen untersucht, die nachgeschaltet von Zytokinen, Wachstumsfaktoren sowie MAPK-/NF-κB-Signalwegen ablaufen. Eine dysregulierte MMP9-Expression oder -Aktivität wird mit Tumorinvasion und Metastasierung, kardiovaskulärem Remodeling, chronisch-entzündlichen Erkrankungen und Neuroinflammation in Verbindung gebracht.
MMP9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MMP9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MMP9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MMP9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MMP9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.